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Revista Yvyraretá. Núm. 33 (2025)
ARTÍCULO CIENTÍFICO
Comparación de dos tipos de
fertilizantes en el proceso de
aclimatación de plántulas in vitro de
Cyrtopodium hatschbachii Pabst,
orquídea en peligro de extinción
Comparison of two types of fertilizers in the
acclimatization process of in vitro seedlings of
Cyrtopodium hatschbachii Pabst, an endangered orchid
DOI:
https://doi.org/10.36995/j.yvyrareta.2025.002
Recibido 27 de febrero 2024; aceptado 9 de junio 2025
Marcela Agustina Báez
1
, Leonardo Da Vega
2
, Débora Sabrina
Cardozo
3
, Aldana Samudio
3
, Guillermo Küppers
4
, Evelyn
Raquel Duarte
1
1
Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Forestales. Laboratorio de
Propagación Vegetativa, Conservación y Domesticación de Recursos Fitogenéticos. Misiones.
Argentina.
agustina20baez@gmail.com , evelyn.duarte@fcf.unam.edu.ar
2
Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Forestales. Laboratorio de
Etnobiología y Desarrollo Comunitario. Misiones. Argentina.
Leo_davega97@hotmail.com
3
Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Forestales. Misiones. Argentina.
sabrinac0789@gmail.com, aldana.samudio@fcf.unam.edu.ar
4
Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Forestales. Laboratorio de Anatomía
de la Madera, Dendrología y Dendrocronología. Misiones. Argentina.
guillermo.kuppers@fcf.unam.edu.ar
Resumen
Cyrtopodium hatschbachii Pabst, es una orquídea en peligro de extinción, la cual
requiere de diversos estudios para generar información apropiada para elaborar
distintas estrategias de conservación tanto in situ como ex situ. El objetivo fue
comparar el efecto de una dosis 2,5 ml L
-1
de un fertilizante líquido, con otro de
liberación controlada en una dosis de 3 g dm
3
durante la aclimatación en plantas
provenientes de polinización geitonogamia y xenogamia. Se utilizaron plantas del
banco de germoplasma in vitro de la Facultad de Ciencias Forestales de Eldorado
Misiones. Las plantas extraídas de los frascos fueron plantadas primeramente en
bandejas de plástico con perlita por 60 días. Transcurrido ese periodo, se trasladaron
a macetas de 200 cm
3
que contenían corteza de pino y perlita en una proporción de
3:1, allí permanecieron durante 30 días; posteriormente se procedió a colocar los
distintos fertilizantes y permanecieron bajo condiciones de invernáculo por 180 días.
Los resultados mostraron diferencias significativas en el número de hojas, diámetro
de pseudobulbo y altura de la planta, pero no en la supervivencia y la masa de las
plantas. En conclusión, los fertilizantes y dosis ensayadas fueron efectivos generando
mayor crecimiento respecto del testigo, pero la sobrevivencia fue similar durante la
aclimatación.
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Revista Yvyraretá. Núm. 33 (2025)
Palabras clave: Aclimatación; Conservación; Micropropagación; Nutrición vegetal;
Orchidaceae.
Abstract
Cyrtopodium hatschbachii Pabst is an endangered orchid, which requires several
studies to gather appropriate information to develop different conservation strategies
both in situ and ex situ. The objective was to compare the effect of a 2.5 ml L
-1
dose of
a liquid fertilizer with a controlled-release fertilizer at a dose of 3 g dm
3
during
acclimatization on plants from geitonogamous and xenogamy pollination. Plants
from the in vitro germplasm bank of the Faculty of Forestry Sciences of Eldorado
Misiones were used. Plants extracted from the flasks were first planted in plastic trays
with perlite for 60 days. After this period, they were transferred to 200 cm
3
pots
containing pine bark and perlite in a 3:1 ratio, where they remained for 30 days; then
the different fertilizers were applied, and they remained under greenhouse conditions
for 180 days. The results showed significant differences in leaf number, pseudobulb
diameter and plant height, but not in plant survival and plant mass. In conclusion, the
fertilizers and doses tested were effective in generating more growth compared to
the control, but survival was similar during acclimatization.
Keywoords: Acclimatization; Conservation; Micropropagation; Plant nutrition;
Orchidaceae
Introducción
La familia Orchidaceae es una de las que posee mayor cantidad de especies
superada únicamente por las Asteraceae, pero es una de las más importantes en
cuanto a la cantidad de especies de relevancia en el negocio de la floricultura, de ahí
el interés en el cultivo, multiplicación y comercialización de estas plantas. Con la
finalidad de poder obtenerlas se realizaron innumerables prácticas de extracción
ilegal y destrucción de hábitat, actividades que llevaron a varias especias a formar
parte de las listas rojas de la Unión Internacional para la Conservación de la Naturaleza
(UICN) en la categoría “en peligro de extinción” (Christenhusz y Byng, 2016; Fay, 2018;
Bello-Castañeda et al., 2023). Entre las que se encuentran amenazadas en la República
Argentina está Cyrtopodium hatschbachii Pabst, cuya planta se caracteriza por tener
inflorescencias con 8 a 15 flores rosadas de labelo amarillo y de agradable fragancia
(Surenciski et al., 2012; Pott et al., 2019; Cardoso et al., 2021). Son plantas
autocompatibles fecundadas por ortópteros o la acción de la lluvia, por lo tanto
pueden formar frutos y semillas viables desde la autofecundación (Cardoso et al.,
2021).
Si bien C. hatschbachii tiene la capacidad de perpetuar sus poblaciones por
medio de la aufecundación, si no se llevan a cabo de manera inminente acciones
efectivas que permitan la conservación de estas orquideas en peligro, las distintas
amenazas terminarán por perjudicar notablemente la existencia de estas plantas en
su habitat natural (Swarts y Dixon, 2017; Cardoso et al., 2021).
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Revista Yvyraretá. Núm. 33 (2025)
En este sentido, la propagación in vitro es una técnica que contribuye en gran
manera con la posibilidad de conservar especies de orquídeas en peligro de extinción
(De Stefano et al., 2022).
A diferencia del cultivo convencional esta no requiere de hongos micorrícicos
y de amplios periodos para obtener una cantidad masiva de ejemplares para la
comercialización o conservación de las especies (Frausto et al., 2019; Mosqueda et al.,
2023). Sin embargo, esta técnica tiene ciertas desventajas como la alta mortalidad de
plantas durante la aclimatación (Deb y Imchen, 2010). Una manera de disminuir estas
pérdidas es a través del uso apropiado de un fertilizante, ya que una buena nutrición
contribuye a la supervivencia de las plantas al cambio de condiciones in vitro a ex vitro
(Rineksane et al., 2023).
El empleo de esta técnica consiste en una serie de fases que empiezan por
cultivar las semillas o explantes dentro de frascos en un medio de cultivo bajo
condiciones asépticas y con luz y temperatura controladas (López y Rangel, 2018;
Frausto et al., 2019). Finalizado el proceso de crecimiento in vitro las plantas son
extraídas de los frascos y sometidas a un proceso de aclimatación (De Stefano et al.,
2022), debido a que deben pasar del cultivo in vitro que es un ambiente controlado a
uno no controlado. La fase de aclimatación y rusticación es una de las que más afecta
el proceso de multiplicación in vitro, ya que durante esta etapa las plantas tienen que
adaptarse a las condiciones de campo. Resulta de vital importancia tener en cuenta
la nutrición, ya que este es el factor que influye notablemente sobre la sobrevivencia
de plantas durante la aclimatación (De Stefano et al., 2022; Rineksane et al. 2023). Por
lo tanto, el tipo de fertilizante que se emplee durante esta fase puede favorecer el
crecimiento y adaptación de las plantas (Rineksane et al., 2023).
Diversos estudios han demostrado que el uso de fertilizante de liberación
contralada, así como los de formulación liquida contribuyen de manera efectiva sobre
el crecimiento y la supervivencia de las orquídeas durante la aclimatación (Ha et al.,
2018; Hendriyani et al., 2019). Sin embargo, la información existente sobre que
fertilizantes y dosis a utilizar es escasa, con lo cual surge la necesidad de realizar
estudios para determinar la correcta nutrición de las orquídeas en las diferentes
etapas del cultivo in vitro, ya que cada especie tiene requerimientos específicos y
particulares, respecto del ambiente apropiado para lograr un buen crecimiento y una
óptima floración (Pardo et al., 2015; Hoshino et al., 2016).
El objetivo del presente trabajo fue evaluar el crecimiento y sobrevivencia de
plántulas de C. hatschbachii de origen geitonogamico y xenogamico germinadas in
vitro empleando dos tipos de fertilizantes, uno de formulación liquida y otro de
liberación controlada.
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Materiales y métodos
Las plantas que se utilizaron en el presente estudio fueron obtenidas por
medio del cultivo in vitro de semillas obtenidas por fecundación manual entre flores
de una misma vara floral (polinización geitonogamica) y flores de distintas plantas
(polinización xenogamica). Dichas plantas previo a su utilización habían permanecido
durante 2 años en el banco de germoplasma de la Facultad de Ciencias Forestales de
la Universidad Nacional de Misiones, ubicado en la ciudad de Eldorado.
Las plántulas fueron extraídas de los frascos y lavadas con abundante agua
corriente y pasadas inmediatamente a bandejas de plástico ovaladas, de 17 x 22 cm y
7 cm de altura, las cuales contenían perlita húmeda. Posteriormente fueron tapadas
con bandejas de las mismas características y permanecieron bajo condiciones de
invernáculo durante 60 días, donde la humedad y temperatura promedio fueron del
orden del 60 al 80 % y 23 al 27°C respectivamente y un nivel de luz en el orden del 27
a 73 µMol m
2
seg
-1
dependiendo del mes del año y la presencia de nubosidad, a su vez
el sustrato se regó cotidianamente para mantener un ambiente húmedo.
Transcurrido ese periodo las plántulas se pasaron a envases de 200 cm
3
que contenían
corteza de pino compostada y perlita en una proporción 3: 1. Después de 30 días
fueron fertilizadas con dos tipos de fertilizantes; por un lado se empleó uno de
liberación controlada como el Plantacote 6M 14-9-15+Mg+micros en una dosis de 3
g.dm
3
de sustrato y por otro lado uno de formulación líquida como el Fertifox
potenciado 7-3-7,5 con ácido naftalen acético en una dosis 2,5 ml L
-1
de agua, el cual
se utilizó a razón de 50 ml para regar las plantas cada 20 días. Se realizaron 6
tratamientos conformados de 4 repeticiones de 5 plantas cada una. En la tabla 1 se
presentan los distintos tratamientos.
Tabla 1. Conformación de los distintos tratamientos
Table 1. Conformation of the different treatments
Tratamientos
Polinización
Fertilizante
1
Geitonogamia
Sin fertilizante
2
Geitonogamia
Fertifox
3
Geitonogamia
Plantacote 6M
4
Xenogamia
Sin fertilizante
5
Xenogamia
Fertifox
6
Xenogamia
Plantacote 6M
Al finalizar el ensayo se realizaron mediciones de las variables: altura total de la
planta (en este caso se consideró el tamaño del pseudobulbo más la hoja verde más
larga, debido a que varias plantas no desarrollaron pseudobulbos al momento de la
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medición), diámetro del pseudobulbo, número de pseudobulbos, de hojas verdes y
secas, supervivencia en porcentaje, peso fresco y peso seco en gramos. Para hacer las
mediciones se emplearon calibres digitales, reglas y balanza de alta precisión. El peso
seco se realizó en una estufa a 60 °C durante 5 días hasta lograr peso constante. Los
datos fueron analizados con un análisis de variancia (ANOVA) y posteriormente sus
medias fueron comparadas con la prueba de Tukey, a través del uso del software
Infostat versión 2020 (Di Rienzo et al., 2020). Para el estudio se empleó un diseño
completamente aleatorizado.
Resultados y discusión
El análisis estadístico entre las variables número de hojas verdes y secas entre
plantas provenientes de polinización geitonogamica y xenogamica dió diferencias
altamente estadísticas (P=0,0001), en tanto, que el número de pseudobulbos no
mostró diferencias significativas (Figura 1). Esto es coincidente en parte con lo
reportado por Arthagama et al. (2021), donde no observaron diferencias significativas
en el número de pseudobulbos así como en la cantidad de hojas que desarrollaron en
los distintos tratamientos utilizados. En cambio, Heredia-Rendón et al. (2009),
demostraron que el uso de fertilizantes nitrogenados en distintas dosis tuvo un efecto
significativo sobre el número de hojas y de pseudobulbos formados en Laelia
halbingeriana Salazar y Soto Arenas. En el caso del estudio de Wang (1996) en
Phalaenopsis sp. sólo se observó un pequeño efecto significativo sobre el número de
hojas entre los distintitos fertilizantes analizados. Por su parte, Jimenez-Peña et al.
(2019) demostraron que regar las plantas con una solución nutritiva cuya formulación
esté compuesta por macro y micronutrientes proporciona un incremento en el
número de hojas y de pseudobulbos, mientras que aquellas plantas donde solo se les
proporciona una solución que presentan únicamente macronutrientes los resultados
son menores.
Por otro lado, los resultados entre los distintos tratamientos con fertilizantes
demarcaron diferencias significativas, por lo que las plantas de distintas
polinizaciones al parecer muestran comportamientos altamente similares (Figura 1)
con las dosis de los dos fertilizantes empleados frente a la evolución de estas variables.
En este estudio las dosis de los fertilizantes empleadas han resultado de manera
apropiada ya que manifestaron diferencias significativas con los tratamientos testigos
(Figura 1).
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Figura 1. Valores medios de la cantidad de hojas y pseudobulbos que se desarrollaron en las
plantas de los distintos tratamientos, además la cantidad de hojas que perecieron al finalizar
el ensayo
Figure 1. Mean values of the number of leaves and pseudobulbs developed on the plants of
the different treatments, in addition to the number of leaves that perished at the end of the
trial
Con respecto al diámetro de los pseudobulbos y altura total de la planta
(considerando la base del pseudobulbo al extremo de la hoja de mayor tamaño), se
observaron diferencias significativas entre los diferentes tratamientos,
manifestándose los mejores valores en ambas variables en el tratamiento 3 donde se
empleó una dosis de fertilizante de liberación controlada (Figura 2). En los estudios de
Arthagama et al. (2021), en cambio, no se encontraron diferencias significativas entre
los tratamientos cuando emplearon diferentes dosis de fertilizante líquido orgánico,
pero si entre el tipo de sustrato empleado, por lo que resulta más relevante el tipo
sustrato frente a la dosis de fertilizante líquido. Por otro lado, también es importante
considerar la frecuencia del fertilizante, ya que es un factor que puede influenciar
notablemente el crecimiento y desarrollo de las orquídeas (Herastuti y EK, 2020). Tal
es así, que el uso de fertilizante foliar cada 14 días tiene un efecto altamente
significativo en el crecimiento de especies del género Dendrobium (Hariyanto et al.,
2019).
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Figura 2. Valores medios de las variables altura de planta y diámetro de pseudobulbo en los
distintos tratamientos
Figure 2. Mean values of plant height and pseudobulb diameter variables in the different
treatments
En cuanto al nivel de supervivencia, los porcentajes fueron del orden del 65 al
90% en los tratamientos estudiados, pero no se observaron diferencias significativas.
En el caso de peso fresco y seco, el tratamiento 2 presentó un valor levemente superior
a los demás, pero sin diferencias significativas (Tabla 2). Según Ha et al. (2018) y
Hendriyani et al. (2019) la dosis óptima de fertilizante puede generar un mayor
crecimiento en las plantas de orquídeas observándose a través de un mayor peso
fresco y seco, contribuyendo de esta manera a la supervivencia de las plantas durante
la fase de aclimatación, pero un tipo de fertilizante y dosis inadecuados puede llevar a
deterioro o mortalidad de la planta.
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Tabla 2. Efecto de las dosis de fertilizante líquido y de liberación controlada sobre las variables
supervivencia, peso fresco y peso seco
Table 2. Effect of liquid and controlled release fertilizer doses on survival, fresh and dry weight
variables
Tratamiento
Supervivencia
(%)
Peso fresco
(g)
Peso seco (g)
1
65±19,14 a
1,30±0,44 a
0,11±0,04 a
2
90±11,54 a
6,79±3,89 a
0,42±0,11 a
Continuación tabla 2
3
90±11,54 a
2,66±0,89 a
0,26±0,08 a
4
75±19,14 a
1,9±1,01 a
0,21±0,09 a
5
90±11,54 a
4,54±2,39 a
0,39±0,04 a
6
90±11,54 a
2,85±3,16 a
0,34±0,04 a
Ref. Se representan valores medio más desvío estándar, letras distintas representan diferencias
significativas para una prueba de Tukey a un nivel de 0,05.
En este trabajo los fertilizantes y dosis ensayados mostraron diferencias
significativas entre los tratamientos en cuanto al número de hojas, tamaño de la
planta y diámetro de pseudobulbos, por lo tanto, en plantas de C. hatschbachii
originadas por polinización geitonogamica o xenogamica bajo las condiciones de este
estudio, el crecimiento de las plantas es influenciado por el tipo de fertilizante
utilizado, líquido o de liberación controlada en las dosis recomendadas en el marbete.
En cambio, tienen igual respuesta en las variables supervivencia y peso fresco y seco
en la etapa de aclimatación una vez colocadas las plantas en las macetas. Por lo tanto,
la utilización de fertilizantes con distinta formulación y composición puede generar
diferencias en el crecimiento durante la fase de aclimatación de las plantas de C.
hatschbachii. Sin embargo, en este estudio, no se observaron diferencias
significativas entre las dosis de los dos fertilizantes y los tratamientos testigos en la
sobrevivencia de plantas.
Experimentos previos han demostrado que es de vital importancia contar con
un tipo y dosis de fertilizante específicos para cada especie de orquídeas, ya que cada
una tiene requerimientos particulares de nutrición que contribuyen a que crezcan y
florezcan apropiadamente (Ha et al., 2018). Por ello, es sumamente importante contar
con información acerca de un sistema de fertilización para tener una óptima
producción en las orquídeas. Los estudios en esta especie deben continuar hasta
lograr más información en cuanto a cuál es la fertilización y nutrición más apropiada
que se requiere para lograr plantas de buena calidad con fines de conservación.
Asimismo, el uso correcto de los fertilizantes conlleva a que el crecimiento sea más
rápido y consecuentemente con esto se reducen los tiempos y costos de producción
de las orquídeas (Wang y Konow, 2002).
17
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Conclusión
El tipo y dosis de fertilizante empleado en la aclimatación de C. hatschbachii
afectó el desarrollo del número de hojas verdes y secas, diámetro de pseudobulbo y
altura de la planta, en cambio la cantidad de pseudobulbo, así como la sobrevivencia,
el peso freso y seco, no mostraron diferencias durante el proceso de aclimatación en
plantas provenientes de polinización geitonogamica y xenogamica, cuando se utilizó
fertilizante líquido (Fertifox) en una dosis de 2,5 ml L
-1
y de liberación controlada
(Plantacote 6M) en una dosis de 3 g dm
-3
de sustrato.
Se recomienda profundizar los estudios con otras dosis de ambos fertilizantes
para conocer mejor su efecto sobre el crecimiento de esta especie.
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